二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶活性檢測試劑盒

Rubisco可催化核酮糖-1,5-二磷酸（RuBP）和CO2結合生成3-磷酸甘油酸，3-磷酸甘油酸可進(jìn)一步在3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脫氫酶的催化作用下生成甘油醛-3-磷酸，反應過(guò)程中伴隨著(zhù)NADH氧化生成NAD+，NADH在340 nm處有特征吸收峰，通過(guò)測定340 nm處吸光度的下降速率即可表征Rubisco活性。

二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶活性檢測試劑盒測定過(guò)程中所需要的儀器和試劑：紫外分光光度計、1 mL 石英比色皿、恒溫水浴/培養箱、臺式 離心機、可調式移液器、研缽/勻漿器和蒸餾水。

樣品處理 ①細菌或細胞：離心收集細菌或細胞到離心管內，按照細菌或細胞數量（104 個(gè)）：提取液體積（mL） 為（500-1000）：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細菌或細胞加入 1 mL 提取液）處理樣品，冰浴超聲破碎細菌 或細胞（功率 20%或 200 W，超聲 3 s，間隔 10 s，重復 30 次），4℃ 10000 g 離心 10 min，取上清置 于冰上待測。 ②組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為 1：（5-10）的比例（建議稱(chēng)取約 0.1 g 組織， 加入 1 mL 提取液）處理樣品，冰浴勻漿，4℃ 10000 g 離心 10 min，取上清置于冰上待測。

二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶活性檢測試劑盒吸光值測定：①立即混勻放入 25℃水浴或培養箱中并開(kāi)始計時(shí)，測定 20 s（總時(shí)間）時(shí) 340 nm 處吸光值，記為 A1 測定和 A1 空白；②準確反應 300 s，測定 320 s（總時(shí)間）時(shí) 340 nm 處吸光值， 記為 A2 測定和 A2 空白；③計算 ΔA 測定=A1 測定-A2 測定，ΔA 空白=A1 空白-A2 空白，ΔA=ΔA 測 定-ΔA 空白。注：空白組只需測定 1-2 次；準確在 20 s 和 320 s 處完成讀數，以保證實(shí)驗結果的準確。